軟瓊脂克隆:克隆形成率反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀
實(shí)驗(yàn)步驟
1.獲取樣本，培養(yǎng)細(xì)胞，
2.調(diào)整細(xì)胞懸液密度為1x103個(gè)/ml細(xì)胞。
3.制備底層瓊脂，*溶化的5%瓊脂和37*C左右預(yù)溫的新鮮*培養(yǎng)液以1: 9比例在40^C均勻混合，加入培養(yǎng)皿(直
徑60mm)中，每皿含0.5%瓊脂培養(yǎng)基2ml,室溫下瓊脂*凝固。
4.制備上層瓊脂,37C密度每皿含200個(gè)的細(xì)胞懸液1.5m移入小燒杯中，加入40C、5%瓊脂等體積混勻，即成0.25%半固
體瓊脂培養(yǎng)基。配好的半固體瓊脂培養(yǎng)基立即加入鋪有底層瓊脂的培養(yǎng)皿中，室溫下瓊脂凝固。37C、5%CO2靜置培養(yǎng)2-
3周。
5.當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)克隆時(shí)，終止培養(yǎng)，棄去培養(yǎng)液，PBS液小心浸洗2次，空氣干燥。甲醇固定15分鐘，棄甲醇后
空氣干燥。用Giemsa染液染色10分鐘，流水緩慢洗去染液，空氣干燥。

 實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2周
2.交付標(biāo)準(zhǔn):克隆形成圖片、計(jì)數(shù)結(jié)果、柱狀圖、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、儀器等)
細(xì)胞包克隆化其他方法
1.稀釋鋪板方法
2.飼養(yǎng)層克隆法
3.毛細(xì)管克隆法
4.熒光激活分選法